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簡要描述:青旗生物提供一百余種基因型不同的克隆感受態(tài)細胞,滿足您的各種分子生物學(xué)實驗需求,如:普通質(zhì)粒構(gòu)建、藍白斑篩選、大質(zhì)粒構(gòu)建、易重組質(zhì)粒構(gòu)建、慢病毒和腺病毒載體構(gòu)建、甲基化DNA克隆、高質(zhì)量質(zhì)粒提取、文庫構(gòu)建等。同時我們還提供多種電擊感受態(tài)細胞,為大質(zhì)粒構(gòu)建、高效率轉(zhuǎn)化和文庫構(gòu)建提供方便。
更新時間:2021-07-20
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
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品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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主要用途 | 僅用于科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
一、克隆感受態(tài)細胞基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
二、產(chǎn)品說明
DH5α菌株是實驗室常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內(nèi)切酶 (endA),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩(wěn)定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>5×108 cfu/μg DNA。
三、克隆感受態(tài)細胞操作方法
1. DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
四、注意事項
1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。